非洲豬瘟檢測方案

更新時間：2023-05-05

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? 1 非洲豬瘟簡介

非洲豬瘟（英文名稱：African Swine fever，簡稱：ASF）是由非洲豬瘟病毒（英文名稱：African Swine fever virus，簡稱：ASFV）感染家豬和各種野豬（如非洲野豬、歐洲野豬等）引起一種急性、出血性、烈性傳染病。非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員，病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直徑為175－215納米，呈20面體對稱，有囊膜。基因組為雙股線狀DNA，大小170－190kb。在豬體內(nèi)，非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細(xì)胞漿中，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中復(fù)制。該病毒可在鈍緣蜱中增殖，并使其成為主要的傳播媒介。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，該病也是我國重點防范的一類動物疫情。

? 2 非洲豬瘟在我國的發(fā)病情況

自2018年8月3日我國確診非洲豬瘟疫情以來，我國已經(jīng)在遼寧、安徽、黑龍江、海南等地接連爆發(fā)非洲豬瘟疫情。盡管非洲豬瘟傳入我國僅幾年的時間，但已經(jīng)在多地接連爆發(fā)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。在目前的情況下，急需一種能對非洲豬瘟進(jìn)行快速檢測的方案！

? 3 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴(kuò)增儀配置清單

項目	序號	物品名稱	型號規(guī)格	單位	數(shù)量	備注
主機(jī) 箱	1.	儀器主機(jī)	HW-ZW16	臺	1
	2.	儀器使用說明書		個	1
	3.	合格證/保修卡		本	2
	4.	儀器電源線		根	1
	5.	鋁合金箱		個	1
配件箱	6.	電子天平	0-500g	臺	1
	7.	樣品杯	50mL	個	24
	8.	移液槍	1-5ml	把	1
	9.	移液槍槍頭	1-5ml	包	1
	10.	移液槍	100μL-1000μL	把	1
	11.	移液槍槍頭	100μL-1000μL	包	1
	12.	移液槍	10μL-100μL	把	1
	13.	移液槍槍頭	10μL-100μL	包	1
	14.	移液槍	2μL-20μL	把	1
	15.	移液槍槍頭	2μL-20μL	包	1
	16.	剪刀		把	1
	17.	鑷子		把	1
	18.	研缽	直徑8cm	個	1
	19.	離心機(jī)	大龍D1008	臺	1
	20.	離心管	1.5mL	個	50
	21.	PCR管	0.2mL	個	50
	22.	非洲豬瘟病毒熒光等溫擴(kuò)增檢測試劑	48T/盒	盒	5
重要配件	23.	漩渦混勻器		臺	1
	24.	畜牧恒溫箱	-10℃~65℃	臺	1
	25.	高速冷凍離心機(jī)	LC-LX-HR165A	臺	1
	26.	研磨儀		臺	1
	27.	移液器（5種型號）		支	10
	28.	冰箱		臺	1

? 4 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴(kuò)增儀技術(shù)參數(shù)

儀器型號	HW-ZW16
樣品通量	16x0.2ml，兼容單管和8聯(lián)管
加熱方式	半導(dǎo)體制冷片結(jié)合電性電阻熱紅外技術(shù)
溫控范圍	室溫～85℃
溫控精度	±0.1℃
溫度均一性	±0.15℃
激發(fā)光波長	第一通道：470nm±10nm
檢測光波長	第一通道：520nm±10nm
激發(fā)光	高亮度LED
檢測器	新型光學(xué)檢測器，結(jié)合數(shù)字電路控制，光信號穩(wěn)定
熒光傳導(dǎo)方式	太空專用光纖傳導(dǎo)
結(jié)果判讀方式	根據(jù)擴(kuò)增曲線軟件自動判讀陰陽性
結(jié)果顯示	可在機(jī)器顯示擴(kuò)增曲線及出峰時間
檢測時間	≤40分鐘
檢測試劑	開放式恒溫?zé)晒鈾z測試劑
操作軟件	自帶軟件
控制方式	觸屏控制
檢測項目	可同時最多檢測16個項目
檢測靈敏度	10～109拷貝/反應(yīng)，且樣品間無交叉污染
儀器分析功能	根據(jù)所檢測樣品，直接分析判定陽性或陰性；也可通過標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行絕對定量
軟件設(shè)置功能	可選擇反應(yīng)程序；可對反應(yīng)程序進(jìn)行設(shè)置，如可設(shè)置反應(yīng)時間、可在反應(yīng)過程中修改反應(yīng)時間（縮短或延長）、可設(shè)置不同溫度，每個溫度檔位差為0.1℃；可將反應(yīng)程序保存為模板；可對不同孔進(jìn)行重命名；可設(shè)置掃描間隔時間，范圍為 18～60S，默認(rèn)間隔為 60S；可設(shè)置陰陽性判斷閾值；閾值線可上下拉動等
工作環(huán)境溫度	18～35℃
儲存溫度	-20℃～55℃
環(huán)境相對濕度	≤85%
工作電壓	100～240V，50～60Hz

? 5 非洲豬瘟病毒熒光等溫擴(kuò)增檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)

作用與用途：用于血液、血球粉、淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體以及豬肉產(chǎn)品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

1.規(guī)格：48次/盒；

2.保存條件：-20℃保存；

3.組成：熒光等溫擴(kuò)增免提取反應(yīng)液：1100ul；Bst DNA聚合酶：75ul；陰性對照：1000ul；陽性對照：200ul；礦物油：1000ul；說明書：1份；

4.有效期：12個月；

5.本試劑盒適用于便攜式熒光定量PCR儀檢測箱及各種其他型號熒光定量PCR儀；

6.反應(yīng)體系：25ul；反應(yīng)時間：1h；報告基團(tuán)：FAM；淬滅基團(tuán)：None；

7.結(jié)果判定：有明確判定標(biāo)準(zhǔn)，被檢樣品熒光信號有指數(shù)型增長，陽性對照Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，陰性對照無Tt值并且無擴(kuò)增曲線即S型擴(kuò)增曲線，結(jié)果成立；被檢樣品Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線為陽性；被檢樣品無Tt值并且無典型擴(kuò)增曲線為陰性；被檢樣品Tt值在45-60之間并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線為可疑。對于可疑結(jié)果應(yīng)重新檢測，如果樣品FAM通道仍有典型S型擴(kuò)增曲線且Tt值≤60，則判定為陽性，否則為陰性；

8.本試劑盒經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心評價，診斷敏感性100%，特異性100%；

9.該產(chǎn)品為疫控（診）【2019】74號文件中推薦的產(chǎn)品；

10. 產(chǎn)品生產(chǎn)廠家具有分子生物學(xué)類診斷制品GMP車間。